隨著一場雨又迎來了一個新的工作日,可能剛起床那會還是睡眼惺忪,但是上班的時候可就要進入工作狀態啦!相信當聰明的您在看到本文章的標題時就能夠知道,我們今天要為您談說的是關于轉化大腸桿菌的實驗。
恒遠問您:轉化大腸桿菌實驗的目的是哪三個方面呢?當然,這可不止簡單的一個問題,既然我們問出了,那么就有答案啦。如果您現在移動右手中的鼠標去搜索轉化大腸桿菌實驗的話一定會出現很多的相關資料,有朋友在購買我公司的產品后提出了需要技術指導,那么我們今天就來仔細的看看本實驗,*終來解答實驗的目的是哪三個方面。
我們為您整理的這套實驗過程簡單明了,只需要十個步驟就可以完成。
1、事先將恒溫水浴的溫度調到42℃。
2、從-70℃ 超低溫冰柜中取出一管(100 μl)感受態菌,立即用手指加溫融化后插入冰上,冰浴5~10 min。
3、加入5 μl 連接好的質粒混合液(DNA含量不超過100 ng),輕輕震蕩后放置冰上20 min。
4、輕輕搖勻后插入42℃水浴中1~2 min進行熱休克,然后迅速放回冰中,靜置3~5 min。
5、在超凈工作臺中向上述各管中分別加入500 μl LB培養基(不含抗菌素)輕輕混勻,然后固定到搖床的彈簧架上37℃震蕩1 h。
6、在超凈工作臺中取上述轉化混合液100-300 μl,分別滴到含合適抗菌素的固體LB平板培養皿中,用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻。
7、如果載體和宿主菌適合藍白斑篩選的話,滴完菌液后再在平板上滴加40 μl 2% X-gal,8 μl 20% IPTG,用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻。
8、在涂好的培養皿上做上標記,先放置在37℃恒溫培養箱中30~60 min 直到表面的液體都滲透到培養基里后,再倒置過來放入37℃恒溫培養箱過夜。
9、在被細菌污染的桌面上噴灑70%乙醇,擦干桌面,寫實驗報告。
10、觀察平板上長出的菌落克隆,以菌落之間能互相分開為好。注意白色菌斑。
上海恒遠感謝您使用來時間觀看了本篇文章,如果您有什么產品需要以及技術問題解惑都是可以來電給我公司詢問的。旁余之話我們不多說,這里給出了一個小提醒,在操作時,玻璃涂布棒上的酒精熄滅后稍等片刻,待其冷卻后再涂。實驗過程中也要細心哦!
已經快要是文章的結尾了,您還記得我們給出的問題嗎?在問題中已經表明實驗目的為三個方面,我們*后就來看看究竟是哪三個方面。
1、用于分子生物學其他研究。
2、將重組DNA分子導入大腸桿菌受體細胞進行復制,增殖和表達,以獲得目的基因。
3、驗證大腸桿菌感受態細胞效果。
原創作者:上海恒遠生物科技有限公司